安捷倫色譜柱緩沖鹽正確的使用方式
瀏覽次數(shù):2097發(fā)布日期:2018-05-28
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使
安捷倫色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長安捷倫色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用
安捷倫色譜柱緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過渡流動(dòng)相以0.2ml/min流速?zèng)_洗安捷倫色譜柱過夜。
2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前,用與初始流動(dòng)相組成相同的過渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗60min,再用該過渡流動(dòng)相以1.0ml/min沖洗安捷倫色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意:過渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同,區(qū)別只是過渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法:
1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗安捷倫色譜柱120min
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗安捷倫色譜柱過夜。強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在
安捷倫色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時(shí)也會(huì)引起保留時(shí)間的變化,累積到一定程度時(shí)還會(huì)導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng),需要一定的時(shí)間才會(huì)體現(xiàn)出來,但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì),因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗安捷倫色譜柱。